眾所周知，養(yǎng)殖場的消毒池是門衛(wèi)消毒系統(tǒng)一個(gè)關(guān)鍵組成部分，是隔絕外界病原微生物進(jìn)入養(yǎng)殖場內(nèi)環(huán)境的重要門戶。筆者通過調(diào)查走訪多家規(guī)模養(yǎng)豬場和養(yǎng)雞場，了解到目前規(guī)模場技術(shù)人員對消毒池的消毒劑選擇、更換頻率、消毒效果的認(rèn)知存在許多誤區(qū)。因此筆者模擬消毒池狀況對當(dāng)前消毒池多種常用消毒劑進(jìn)行殺菌對比試驗(yàn)，希望試驗(yàn)結(jié)果能對規(guī)模養(yǎng)殖場的相關(guān)技術(shù)人員起到參考借鑒作用。
　　一、材料

　　1、消毒劑：NaOH水溶液（2%水溶液，燒堿為市場采購工業(yè)級(jí)，25KG裝，含量98%，批號(hào)：20150304）；消毒威水溶液（含二氯異氰脲酸鈉30%，由湖南五指峰有限公司提供，批號(hào)：20150501，按1:1200倍稀釋）；五指峰新菌敵水溶液（含量：戊二醛5%+癸甲溴銨5%，批號(hào)：20150517，由湖南五指峰生化有限公司提供，按1:500倍稀釋）；好典水溶液（含聚維酮碘5%，批號(hào)：20150602，由湖南五指峰生化有限公司提供，按1:300倍稀釋）。

　　2、消毒劑指標(biāo)菌：大腸埃希氏菌（8099）、多殺性巴氏桿菌（禽株）、金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、蠟狀桿菌芽孢（SSICl/1）。（均購自中國獸藥監(jiān)察所）
　　3、中和劑的配制
　?。?）中和劑（1）：自制復(fù)合中和劑，用于中和消毒威水溶液、新菌敵水溶液、好典水溶液。精密稱取無水磷酸氫二鈉2.83g、磷酸二氫鉀1.36g、胰蛋白胨10g、牛肉粉3g、葡萄糖2g、硫代硫酸鈉5g、卵磷脂3g、甘氨酸3g、吐溫-80各30mL。將各成分加入到1L蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸氣滅菌20min，冰箱保存?zhèn)溆谩＃ㄒ陨显噭┖驮囁幘徸試幖瘓F(tuán)化學(xué)試劑有限公司）
　?。?）中和劑（2）：2%NaOH水溶液，需要等當(dāng)量的酸來中和。因此，通過計(jì)算摩爾含量，將5.56g含量為36%的濃HCl溶液加入1000g純化水中配制成NaOH水溶液中和劑，于121℃壓力蒸氣滅菌20min，冰箱保存?zhèn)溆谩?br /> 　　4、稀釋液：氯化鈉注射液（0.9%）。（購自四川科倫藥業(yè)公司）
　　二、方法｛參照《獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范》（1992）農(nóng)（牧藥）字第101號(hào)｝
　　1、中和劑選擇試驗(yàn)：選擇指定濃度的消毒劑，以蠟樣桿菌芽孢和大腸桿菌為受試菌，分別進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。試驗(yàn)可分為6組：第1組：消毒劑＋菌懸液；第2組：（消毒劑＋菌懸液）＋中和劑；第3組：中和劑＋菌懸液；第4組：（消毒劑＋中和劑）＋菌懸液；第5組：稀釋液＋菌懸液；第6組：中和劑＋稀釋液。
　　2、細(xì)菌、芽孢懸液定量殺菌試驗(yàn)
　?。?）將制備的菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，然后用氯化鈉注射液稀釋成含菌106～107CFU/mL的試驗(yàn)菌液；
　?。?）將消毒劑樣品用純化水按指定稀釋比例稀釋至測試濃度；
　?。?）吸取0.5mL試驗(yàn)菌液于4.5mL測試濃度的消毒劑溶液內(nèi)；
　　（4）置20℃水浴中作用5分鐘；
　　（5）立即吸取上述菌藥混合液1.0mL，加入9.0mL中和液中混勻；
　　（6）以氯化鈉注射液（0.9%）代替消毒液，同時(shí)進(jìn)行上述各步驟，作為對照組；
　?。?）以上各步驟均設(shè)置一個(gè)平行對照；
　?。?）中和10分鐘后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，37℃培養(yǎng)24h，計(jì)算殺菌率；
　　（9）模擬消毒池實(shí)際狀況，將各試驗(yàn)消毒劑敞開暴露在室外，每天重復(fù)進(jìn)行上述試驗(yàn)，共7天，記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)，分析試驗(yàn)結(jié)果。
　　三、結(jié)果
　　1、中和劑選擇試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果為第1組不長菌或有極少數(shù)菌生長；第2組長少量菌且比第1組多，比第3、4、5組的菌數(shù)少；第3、4、5組的菌數(shù)相當(dāng)且誤差率小于15%；第6組無污染。說明所配制中和劑在細(xì)菌和芽孢的殺菌試驗(yàn)中可有效中和本消毒劑，并對細(xì)菌、芽孢及培養(yǎng)基無不良影響。
　　

　　2、消毒劑（第一天）對細(xì)菌、芽孢懸液定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果見表一。

　　3、試驗(yàn)持續(xù)7天，每天重復(fù)殺菌試驗(yàn)效果見表二。

　　四、結(jié)論
　　2%NaOH水溶液、湖南五指峰生化有限公司生產(chǎn)的消毒威1:1200倍稀釋、新菌敵1：500倍稀釋、好典1:300倍稀釋的水溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用），作用5分鐘對大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢的殺滅率99.9%以上，其消毒效能符合規(guī)定。
　　四種試驗(yàn)消毒劑對大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢四種消毒劑指標(biāo)菌的殺滅率在第一天都能達(dá)到99.9%以上，其消毒效能符合要求。2%NaOH水溶液在第二天殺菌率未達(dá)到99.9%以上；30%消毒威1:1200倍稀釋的水溶液在第四天殺菌率未達(dá)到99.9%以上；新菌敵1：500倍稀釋的水溶液在第三天殺菌率未達(dá)到99.9%以上；好典1:300倍稀釋的水溶液在第二天殺菌率未達(dá)到99.9%以上，其消毒效能不符合規(guī)定。
　　五、說明
　　1、依據(jù)《現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法》的體外殺菌實(shí)驗(yàn)的菌落計(jì)數(shù)方法，低于5個(gè)菌落的視同為殺菌完全，故試驗(yàn)消毒劑大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢的殺菌率計(jì)為100%；
　　2、氯化鈉注射液對照組的平板均有大量細(xì)菌生長，其菌落數(shù)按試驗(yàn)菌液100倍稀釋后的菌落數(shù)計(jì)算。
　　3、依據(jù)《獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范》（1992）農(nóng)（牧藥）字第101號(hào)的試驗(yàn)消毒效能判斷標(biāo)準(zhǔn)，殺滅指數(shù)須達(dá)103或殺菌率達(dá)99.9%以上，故試驗(yàn)消毒劑消毒效能符合規(guī)定。
　　六、分析
　　通過試驗(yàn)結(jié)果可知，四種消毒池常用消毒劑在現(xiàn)配現(xiàn)用的情況下都具有良好的消毒效果，具有速效、強(qiáng)效的殺滅效力，在5分鐘內(nèi)即車輪緩慢經(jīng)過消毒池時(shí)能有效消毒。在持續(xù)7天的試驗(yàn)中可見，NaOH水溶液和好典稀釋液在暴露室外的第二天還能維持90%以上對四種消毒劑指標(biāo)菌的殺滅率，在第四天殺菌率下降一半，在第六天基本不具備殺菌能力。分析其原因，NaOH水溶液能與空氣中的二氧化碳反應(yīng)生成NaCO3，使溶液中NaOH含量迅速下降，導(dǎo)致殺菌效力急速遞減；好典中的聚維酮碘在高溫和陽光曝曬下急速分解，含量急速下降，使殺菌效力快速降低。這兩種消毒劑不適合長期使用，因此建議養(yǎng)殖場用戶不要在消毒池使用NaOH和聚維酮碘溶液。消毒威和新菌敵稀釋液在1-2天內(nèi)能維持99.9%以上的殺菌率，在第四天還能維持90%左右的殺菌率，在第七天還具有60%～80%的殺菌率，具有高效、速效、長效作用，能做為消毒池專用消毒劑使用。消毒威主要成分為二氯異氰脲酸鈉，是一種高效、廣譜、新型內(nèi)吸性殺菌劑，可殺滅各種細(xì)菌、藻類、真菌和病毒；化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，便于貯存運(yùn)輸；使用安全、簡便、用量少、藥效持續(xù)時(shí)間長；作用在物體表面能慢慢地釋放次氯酸（HClO），通過使菌體蛋白質(zhì)變性，改變膜通透性，干擾酶系統(tǒng)生理生化及影響DNA合成等過程，使病原體迅速死亡。新菌敵主要含有戊二醛和癸甲溴銨。戊二醛屬高效消毒劑，具有廣譜、高效、低毒、對金屬腐蝕性小、受有機(jī)物影響小、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，主要作用于菌體蛋白的巰基、羥基、羧基和氨基，可使之烷基化，引起蛋白質(zhì)凝固造成細(xì)菌死亡。癸甲溴銨為雙鏈季銨鹽類陽離子表面活性劑，其季銨陽離子能主動(dòng)吸引并富集于帶負(fù)電荷的細(xì)菌和病毒表面，阻礙細(xì)菌代謝，導(dǎo)致其膜的通透性發(fā)生改變。二者復(fù)配而成的新菌敵消毒劑，對各類病原微生物具有高效、速效、長效的殺滅作用，使用后殘留少、安全、環(huán)保，是理想的新型復(fù)配消毒劑。
　　通過結(jié)論分析，我們推薦在養(yǎng)殖場消毒池使用30%消毒威（通用名：二氯異氰脲酸鈉粉）按1:1200倍稀釋、新菌敵（通用名：戊二醛癸甲溴銨溶液）按1:500倍稀釋進(jìn)行車輪和鞋底消毒，每5-6天更換1次；不建議使用燒堿（NaOH）和聚維酮碘溶液消毒。